Для определения сахара в спинномозговой жидкости можно использовать любой из методов, принятых для определения сахара в крови.
Йодометрический способ Хагедорна и Йенсена (см. табл. 5)
Принцип .
1) Осаждение белков .
2) Определение сахара .
Таблица 5
Таблица для определения сахара в СМЖ по Хагедорну и Йенсену
Микроскопия ликвора
Унифицированный метод подсчета количества форменных элементов
Принцип . При помощи микроскопа и счетной камеры определяют число в ликворе лейкоцитов после разрушения эритроцитов.
Нормальное содержание лейкоцитов (цитоз) в 3 мкл ликвора следующее: в жидкости из желудочков мозга – 0–3 клетки, в жидкости из большой цистерны – 0–2 клетки, в жидкости, полученной при люмбальной пункции, – 7—10 клеток. У детей цитоз выше, чем у взрослых, и с возрастом снижается; если у ребенка до 3 месяцев в 1 мкл находится 20–23 клетки, а к году 14–15 клеток, то их число снижается приблизительно на 1 клетку за год жизни и к 10 годам составляет 4–5 клеток в 1 мкл.
Повышенный цитоз (плеоцитоз) наблюдают при органических поражениях вещества мозга и воспалительных поражениях мозговых оболочек.
Количество эритроцитов подсчитывают в счетной камере Горяева или Фукса – Розенталя. Эритроциты обнаруживаются в прозрачной бесцветной жидкости. При наличии 900—1000 эритроцитов в 1 мкл наблюдается легкая опалесценция жидкости, при наличии 2000 эритроцитов отмечается едва заметное розовое окрашивание, при наличии 4000–5000 эритроцитов жидкость носит геморрагический характер. Для диагностики внутричерепного кровоизлияния значение имеет не только количество эритроцитов, но и нарастание их численности при исследовании спинномозговой жидкости в динамике.
Дифференциация клеточных элементов в счетной камере
В счетной камере с сухой системой (окуляр 15Х или 10X, объектив 40Х) можно различить почти все клеточные элементы. Реактив окрашивают ядра клеток в красновато-фиолетовый цвет, при этом цитоплазма остается бесцветной.
Дифференциация в окрашенных препаратах
Окраска по Розиной.
Окраска по Возной.
Окраска по Алексееву. Метод пригоден для проведения срочного цитологического исследования.
Морфология клеточных элементов
Тканевые моноциты : размер клеток от 7 до 10 мкм. В нормальном ликворе иногда могут встречаться в виде единичных экземпляров. В большом количестве обнаруживаются после проведенных операций на ЦНС, при длительных вялотекущих воспалительных процессах – в оболочках (туберкулезном менингите) и др. Наличие тканевых моноцитов в послеоперационном периоде свидетельствует об активной тканевой реакции и нормальном процессе заживления.
Макрофаги . В нормальном ликворе макрофаги не обнаруживаются. Наличие макрофагов при нормальном цитозе наблюдают при воспалительном процессе и после кровотечения. Часто они встречаются в послеоперационном периоде, что имеет прогностическое значение и говорит об активном восстановлении ликвора.
Зернистые шары (липофаги, клетки с жировой инфильтрацией, жировой дистрофией) – это макрофаги с наличием в цитоплазме частиц жира. Зернистые шары обнаруживаются в патологическом ликворе, полученном из мозговых кист, при опухолях, в очагах распада мозговой ткани.
Нейтрофилы в камере идентичны по виду нейтрофилам периферической крови. Наличие в ликворе нейтрофилов даже в минимальных количествах указывает на бывшую или имеющуюся воспалительную реакцию. Нейтрофилы могут встречаться при наличии свежей крови в ликворе и после операций на ЦНС. Нейтрофилы в нормальном ликворе чаще всего подвергаются изменениям (таким как распад клеток, лизис ядра, наличие голых ядер). Преобладание в ликворе неизмененных нейтрофилов говорит об остром воспалительном процессе, присутствие измененных нейтрофилов – о затухании воспалительного процесса, сочетание измененных нейтрофилов с сохранившимися – о продолжающемся воспалении. Неизмененные нейтрофилы всегда встречаются в ликворе с примесью свежей крови.
Эозинофилы в камере определяются по характерной равномерной блестящей зернистости. Эозинофилы встречаются при токсических реактивных менингитах, субарахноидальных кровоизлияниях, туберкулезных и сифилитических менингитах, цистицеркозе, опухолях мозга. Для цистицеркоза (т. е. заболевания, связанного с паразитированием в тканях человека личиночной стадии цепня свиного – цистицерка) характерны лимфоидный плеоцитоз (т. е. наличие аномально большого количества лимфоцитов в спинномозговой жидкости, которая омывает головной и спинной мозг), небольшое количество плазматических клеток, тканевых моноцитов и эозинофилов. Измененные клетки сохраняют только контуры цитоплазмы и остатки ядра. Определить природу таких клеток не представляется возможным.
Эпителиальные клетки (мезотелиальные, арахноэндотелиальные), ограничивающие подпаутинное пространство, обнаруживаются редко. Это довольно крупные клетки, чаще округлые, с небольшими овальными ядрами. В камере имеют сходство с клетками плоского эпителия.
Клетки эпендимы желудочков мозга. Клетки эпендимы обнаруживаются в ликворе часто. В люмбальной жидкости их можно встретить в тех случаях, когда при спинальном проколе выпускается более 7 мл ликвора.
Опухолевые клетки
Клетки первичных и метастатических опухолей обнаруживают в камере и в окрашенном препарате. Изучение данных клеток требует специальной подготовки.
Кристаллы находят в спинномозговой жидкости редко. В случае распада опухоли в содержимом кисты обнаруживают кристаллы гематоидина, билирубина, холестерина.
Элементы эхинококка – крючья, сколексы и обрывки оболочки пузыря – могут быть при множественном эхинококкозе оболочек (их находят очень редко).
Бактериоскопическое исследование на микобактерии туберкулеза
Исследование проводится подобно другим биологическим жидкостям, но при подозрении на туберкулезный менингит возможно проведение следующих дополнительных проб.
Триптофановая реакция
Положительный результат наблюдается при туберкулезном менингите, в отличие от менингитов другой этиологии. Гнойный ликвор для проведения этой реакции непригоден.
Реакция Левинсона также предложена для распознавания туберкулезного менингита.
Микробиологическое исследование спинномозговой жидкости
Микробиологическое исследование спинномозговой жидкости (СМЖ) необходимо в случаях, подозрительных на менингит, а также в случае комы и при неврологических симптомах неясного генеза.
СМЖ в норме стерильна, поэтому положительный результат – это всегда расшифровка этиологического диагноза, при помощи которого можно в ряде случаев предотвратить смертельный исход заболевания.
Причины менингитов очень разнообразны. Наиболее часто из ЦСЖ выделяют следующие микроорганизмы:
1) при гнойных менингитах – N. meningitidis, S. pneumoniae, S. aureus, Streptococcus групп А, В., Proteus, Pseudomonas, E. coli, Klebsiellae, Achromobacter и др.;
2) при серозных менингитах – M. tuberculosis, Leptospira, Toxoplasma gondii, вирусы Cryptococcus neoformans (при вирусологическом исследовании).
Взятие проб СМЖ должно проводиться при четком соблюдении правил асептики, исключающих кожное и воздушное осеменение СМЖ. Первые капли СМЖ (до 1 мл) собирают в пробирку и отправляют на цитологическое исследование. Для посева используют следующую порцию жидкости, собираемую в стерильную пробирку в количестве 2,5 мл. При подозрении на туберкулезную или грибковую этиологию менингита выпускается не менее 10 мл ЦСЖ.
Учитывая, что один из важных возбудителей менингита (N. Meningitidis) очень чувствителен к охлаждению, взятые пробы доставляются в лабораторию как можно быстрее, а до этого хранятся строго при 37 °C. Во всех случаях, подозрительных на менингит, следует брать для микробиологического исследования материал из возможного первичного очага инфекции: раны после нейрохирургических и других оперативных вмешательств, мазки из носоглотки, среднего уха, производить посев крови.
При нелеченых случаях менингита по внешнему виду могут быть выявлены такие возбудители, как S. pneumoniae, N. meningitidis, H. influenzae (полиморфные грамотрицательные коккобациллы). Присутствие в мазках неспоровых четко грамположительных коротких объемных палочек позволяет заподозрить L. monocytogenes в качестве возбудителя менингита. Результаты первичной микроскопии немедленно сообщает врач-лаборант лечащему врачу, который впоследствии определяет тактику лечения.
