Кристаллы гематоидина имеют форму тонких иголок (редко – пучков или звезд), а также ромбов золотисто-желтого цвета. Данные образования являются продуктами распада гемоглобина, формируются внутри гематом и больших кровоизлияний, в отмерших пластах клеток (если там была кровь). В приготовленных препаратах мокроты кристаллы гематоидина (включение в клетках, образующееся при заболеваниях) располагаются на фоне мертвых тканей и эластических волокон. Кристаллы гематоидина важно отличать от зерен гемосидерина – золотистых включений во внутренней среде макрофагальных клеток, дающих положительную реакцию с берлинской лазурью.
Кристаллы холестерина – бесцветные четырехгранные, похожие на таблички образования, возникающие при разложении жироперерожденных клеток, застое мокроты в различных полостях, располагаются на фоне мертвой ткани (туберкулезное поражение, новообразования, абсцессы, эхинококковые кисты и др.). Кристаллы жирных кислот представлены в виде длинных тонких иголочек, их спутником часто становятся капельки жира. Они содержатся в гнойной мокроте (пробки Дитриха), образуются при нахождении мокроты в полостях (бронхоэктатическая болезнь, абсцесс). Изучение окрашенных препаратов: собранные из 4–6 различных мест гнойные частицы мокроты помещают на стекло, аккуратно растирают другим предметным стеклом до однородной массы, высушивают на воздухе, фиксируя над пламенем горелки. Препараты окрашивают разными способами, микроскопируют с иммерсионной системой (на препарат добавляют каплю стерильного масла или глицерина, затем рассматривают под объективом). Для изучения и обнаружения клеток крови в мокроте используют несколько типов окраски. Этот метод имеет много погрешностей, используется как ориентировочный. Окраску по Романовскому – Гимзе используют для исследования отдельных клеточных элементов крови в мокроте. В данном случае удается обнаружить следующие виды клеток: нейтрофилы – клетки, составляющие основную массу лейкоцитов. При тяжелых заболеваниях легочной системы встречаются измененные формы легкого (бронхоэктазы, туберкулез, абсцесс). Появление в значительном количестве измененных форм при пневмонии указывает на начало распространения патологического процесса, а их уменьшение говорит об улучшении и процессах выздоровления. Лимфоциты, в свою очередь, могут быть не только из крови, но и тканевого происхождения – из лимфоидной ткани гортани и бронхов. Присутствуют в мокроте в больших количествах при туберкулезе, коклюше, злокачественных новообразованиях лимфоидной ткани мезенхимального происхождения (лимфосаркомы). Эозинофилы, располагающиеся в виде скоплений, встречаются при бронхиальной астме. Базофилы и моноциты (фракции лейкоцитов) обнаруживаются в единичных экземплярах. Признаком легочного кровотечения служит лишь большое количество этих клеток (они выстраиваются в виде скоплений, опутанных слизью). Окраска препаратов для бактериоскопического исследования проводится разными способами и имеет довольно важное диагностическое значение. Стрептококки, стафилококки, палочки Фридлендера и другие микроорганизмы выявляются в препарате мокроты, окрашенном по Граму. Правильность нахождения этих бактерий всегда должна подтверждаться бактериологическим исследованием с посевом бактерий. Окраска по Граму – Синеву: окрашивают карболовым раствором генцианового фиолетового в течение 1,5–2 мин. (препарат накрывают фильтровальной бумагой и сверху наливают краситель). Убирают фильтровальную бумагу, опускают в раствор Люголя на 2–3 мин., затем обесцвечивают в спирте до сероватого цвета, промывают в воде. Потом докрашивают 10 %-ным раствором карболового фуксина в течение 10–15 с, промывают в воде и высушивают над пламенем горелки. Бактерии, окрашивающиеся по Граму в синий цвет, называются грамположительными, а неокрашивающиеся (имеющие красную окраску) – грамотрицательными. К грамположительным бактериям относятся стрептококки, стафилококки, палочки дифтерии. К грамотрицательным микроорганизмам относятся клебсиелла, протей и др. Стрептококки имеют вид мелких круглых бактерий, при микроскопическом исследовании располагаются по цепочке или отдельно. Вызывают такие тяжелые заболевания легких, как крупозная пневмония, абсцесс легкого или являются сапрофитами, т. е. не вызывают ничего. Стафилококки имеют сходный внешний вид со стрептококками, вызывают те же заболевания, под микроскопом они располагаются в виде виноградных гроздей либо отдельно. Очень часто при посеве мокроты можно увидеть как стрептококков, так и стафилококков, поскольку в настоящее время заболевания легких вызывают много микробов (микст-инфекция). Палочки Фридлендера имеют вид толстых коротких палочек, расположенных по паре и образующих слизистые капсулы; являются возбудителями особенно тяжело протекающей пневмонии. Большое значение бактериоскопическое исследование приобрело в связи с распространением туберкулеза в нашей стране. Применяется для обнаружения микобактерий туберкулеза. Существует несколько методов выявления возбудителей в мокроте. Исследование микобактерий методом люминесцентной микроскопии: туберкулезные бактерии, окрашенные специальным красителем ауромином, люминесцируют (светятся) под влиянием ультрафиолетовых лучей, видны как золотые палочки. Данный метод позволяет обнаружить микроорганизмы достаточно быстро, он более надежен и чувствителен. Часто в препаратах не удается найти микобактерии туберкулеза. В этих случаях прибегают к бактериологическому исследованию: небольшое количество исследуемой мокроты помещают в посуду (чашку) с питательной средой, на которой растут возбудители туберкулеза. Микобактерии растут на особых средах, содержащих яичный белок и глицерин, или сложных, состоящих из искусственно полученных питательных веществ. Все бактерии, вызывающие заболевания, теплолюбивые, поэтому для их роста нужна постоянная температура 37 °C. Микроорганизмы растут очень медленно, их можно увидеть через 28–40 дней. На твердых питательных средах они образуют сухие, сморщенные округлые колонии (скопление большого количества бактерий, видимых невооруженным глазом) в виде кос или жгутов. В жидкой питательной среде туберкулезные палочки растут быстрее (на 7– 10-й день), образуя поверхностную сухую бугристую пленку. Данный метод позволяет выявить микобактерии, однако он слишком трудоемок и относительно дорог, применяется для определения возможных методов лечения и проводится лабораторией туберкулезных диспансеров. В специализированных исследовательских лабораториях иногда применяют метод определения микобактерий туберкулеза путем заражения мышат-сосунков (биологический метод). Однонедельным мышатам в брюшко вводят выбранное количество мокроты от обследуемого. Через определенное время мышата погибают, при вскрытии делают мазок-отпечаток из тел павших животных и обнаруживают размножившиеся бактерии. Этот метод исследования, как правило, имеет научно-исследовательский характер и используется в рамках больших экспериментов. Наиболее достоверный и наиболее дорогостоящий метод выявления возбудителей туберкулеза – метод ДНК-зондов и полимеразной цепной реакции. Сущность методов: в лаборатории имеется исходное генетическое строение бактерии туберкулеза. Данный материал лаборанты встраивают в бактерии; если он подходит, тогда идет интенсивное размножение возбудителя, если нет, он отторгается.
ПЦР (полимеразная цепная реакция) в настоящее время является одним из самых современных, быстрых и точных методом диагностики различных инфекций.
Высокая специфичность ПЦР характеризуется тем, что в исследуемом материале выявляется уникальный, присущий только данному возбудителю фрагмент ДНК.
Метод ПЦР позволяет наблюдать даже единичные клетки бактерий или вирусов. ПЦР помогает выявить возбудителей инфекций даже в тех случаях, когда другими видами анализов (бактериологическими, иммунологическими, микроскопическими) это провести не представляется возможным. Применение ПЦР весьма эффективно в отношении инфекционных возбудителей с высокой антигенной изменчивостью и внутриклеточных паразитов. Надежность метода составляет 99,9 %.
Изучение грибковой флоры в мокроте. Иногда в неокрашенном или окрашенном препарате мокроты можно встретить различные виды грибов. Это могут быть дрожжевые грибы рода кандида, представленные в мазке в виде почкующихся клеток и коротких отпочкованных нитей (клетки округлой формы, нити ветвистой формы с находящимися на них спорами). Присутствие грибов рода кандида говорит об их активном размножении, но не позволяет поставить диагноз кандидомикоза (вызываемое ими заболевание). Наличие кандид может говорить не только о кандидозе (молочница), но и наблюдаться как временное явление после приема антибиотиков, угнетения иммунитета под влиянием различных факторов (лучевая, химиотерапия, ВИЧ/СПИД, прием гормонов и т. д.). Необходимо сделать ряд повторных исследований с учетом жалоб и состояния обследуемого. Дрожжевой гриб, вызывающий тяжелое заболевание криптококкоз, имеет вид круглых, почкующихся клеток с толстыми двойными стенками. Плесневый гриб (вызывает заболевание аспергиллез) состоит из обрывков широких нитей и круглых темно-зеленых спор. Лучистый грибок актиномицет обнаруживается в мокроте при поражении легких актиномикозом. Для его обнаружения в мокроте ищут мельчайшие сероватые или желтоватые зернышки, представляющие друзы (тело) грибка, и исследуют под микроскопом. При большом увеличении центр друзы состоит из густо переплетающихся нитей, а периферия – из булавовидных образований с расширениями на концах, сильно преломляющими свет (отсюда название «лучистый»). При окрашивании по Граму тело гриба окрашивается в синий цвет, а расширения – в розовый; при окраске по Цилю – Нильсену булавовидные утолщения приобретают красный цвет. Важным разделом исследования мокроты является определение ее химической реакции. Для определения реакции мокроты необходимо приложить к ней смоченные дистиллированной водой полоски синей и красной лакмусовой бумажки. При нейтральной реакции (pH 6,8–7,6) мокроты цвет бумажки не изменяется; при кислой реакции (pH 5,5–6,7) приобретает красный цвет синяя бумажка, а красная не меняется; при щелочной реакции (pH 8,0–8,5) красная бумажка синеет, а синяя не меняется. В настоящее время многие лаборатории используют экспресс-методы определения реакции мокроты с помощью специальных диагностических тест-полосок (чаще всего это полоски фирмы «Сенсор»).
