Культуральный метод является стандартом. Для транспортировки применяется среда (сукрозосульфат), которая содержит антибиотики: нистатин, ванкомицин, гентамицин. Среда с пробой остается охлажденной, посев в среду культивирования рекомендуется провести в пределах суток. Культура клеток (Мак-Коя) с пробой хранится от 24 до 72 ч, а затем проводятся окрашивание (йодом, помеченными флуоресцином моноклональными антителами) и микроскопия. Чувствительность метода – около 70 %, при повторном пассаже через среду культивирования выявляется еще от 10 до 20 % случаев инфицирования.
Серологические реакции регистрируют не саму бактерию, а последствия ее пребывания в организме. Известно, что микроорганизм или его антигенные компоненты могут не выявляться в месте первоначальной инфекции. Но тем не менее при хронической инфекции время от времени высвобождаются антигены хламидий из клеток, в результате чего индуцируется гуморальный ответ и накопление специфических сывороточных антител, которые выявляются следующими исследованиями: реакцией связывания комплемента – РСК, иммуноферментным анализом (ИФА), реакцией непрямой иммунофлуоресценции (РНИФ), реакцией непрямой гемагглютинации (РНГА), непрямым иммунопероксидазным анализом (IPA), реакцией микроиммунофлуоресценции (МИФ).
В основе ИФА-методов лежит обнаружение специфических антител, которые накапливаются в секретах и сыворотке крови организма в процессе иммунного ответа на проникновение возбудителя инфекционного заболевания. При исследованиях установлена высокая степень зависимости между показателем антихламидийных антител в сыворотке крови и реальным наличием хламидийных антигенов в организме. Антитела относятся к следующим классам иммуноглобулиновых молекул: M, G, A. При остром инфекционном процессе у пациентов наблюдаются антитела класса М и быстро увеличивающееся число антител классов A и G. Однако при хроническом течении заболевания выявляются специфические антитела классов A и G, концентрации которых не изменяются в течение продолжительного времени. У пациентов с течением без признаков заболевания выявление антител класса A в низких титрах в течение многих недель говорит о присутствии микробной персистенции. Постоянно низкие титры специфических антител класса G говорят о давно перенесенной хламидийной инфекции. В процессе терапии двух– или трехкратное снижение количества антител классов A и G указывает на ее благополучное проведение.
Показатели специфических антител не свидетельствуют о клинической форме, локализации и течении инфекции. Но отсутствие антител к хламидиям исключает заболевание, а серологические тесты можно применять как метод скрининга у населения с невысокой частотой хламидийной инфекции. В случае положительного теста рекомендуется подтверждение наличия инфекции обнаружением специфического антигена, культуральным методом.
Иммуноцитологические реакции . Выявление специфического антигена является более доступным и быстрым способом диагностики хламидиоза. Существуют два доступных метода выявления антигена хламидий. Это прямое окрашивание флуоресцирующими моноклональными антителами ЭТ в мазках и метод ELISA. Ложноположительные результаты обоих методов не превышают 3 %. При обследовании населения с низкой частотой заболевания (2 %) положительная прогностическая ценность метода составляет 50 %, т. е. положительный результат теста оказывается правильным только в половине случаев.
Методы экспресс-диагностики хламидий : применяются иммунохроматография и ферментспецифическая реакция.
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) увеличивает число специфических участков ДНК в 100 тыс. раз и более, делая их доступными для идентификации. Метод считается оптимальным для диагностики хламидиоза у популяций с низким уровнем инфицирования. Его чувствительность и специфичность составляют 100 %.
Цитологический метод, основанный на обнаружении специфических внутриклеточных «включений» в соскобах с эпителия, окрашенных по Папаниколау, используется редко, так как очень неточен, его чувствительность составляет около 20 %. Метод можно рекомендовать только для диагностики хламидийных конъюнктивитов у новорожденных.
Трихомониаз
Это инфекционное заболевание половых органов, которое вызывается влагалищными трихомонадами. Трихомонада – это одноклеточный паразит, относящийся к классу жгутиковых. Имеет грушевидное тело, жгутики и волнообразную мембрану, может активно перемещаться. Образует псевдоподии и проникает в межклеточное пространство. Возбудитель поражает преимущественно участки слизистых оболочек, выстланных плоским цилиндрическим эпителием (эндоцервикс, уретру). Основной путь заражения – половой, это объясняется неустойчивостью трихомонад во внешней среде. Инкубационный период составляет от 3 дней до 4 недель. Урогенитальный трихомониаз выявляется у 70 % женщин, страдающих белями. Наиболее часто поражается влагалище, реже – выводные протоки бартолиновых желез, цервикальный канал, матка, придатки. Это заболевание редко встречается у девочек, учитывая половой путь заражения. Биопсия при урогенитальном трихомониазе производится крайне редко. Однако при морфологическом исследовании выявляется воспалительный инфильтрат с выраженным полнокровием, отеком слизистой и подслизистой оболочек. Воспалительные изменения сопровождаются дистрофией и изъязвлением плоского эпителия.
Кольпоскопия . Часто при кольпоскопии можно видеть эрозии, полипы, точечные кровоизлияния в слизистую шейки матки по типу «клубника» или «укусы блох». Определяется выраженная сосудистая реакция, сосуды реагируют на уксусную кислоту. Пузырьки в выделениях за счет углекислого газа имеют примерно одинаковую величину и сине-фиолетовый цвет.
Микроскопия . У женщин материал для исследования берут из всех подозрительных участков и прежде всего – из влагалища и уретры, у мужчин – из мочеиспускательного канала. Полученный материал рекомендуется исследовать в свежем и окрашенном состоянии. Целесообразно проводить посевы на питательные среды. В неокрашенных препаратах трихомонада имеет вид грушевидного тела размером немного больше лейкоцита с характерными толчкообразными движениями. При исследовании в темном поле зрения хорошо видны жгутики. Окрашенные метиленовым синим трихомонады имеют протоплазму с ячеистым строением, эксцентрически расположенное удлиненное ядро, жгутики не видны. Хорошо определяются маленькая ротовая щель (цитостом), многочисленные пищеварительные вакуоли, наполненные заглоточным материалом (микробами, лейкоцитами, эритроцитами, сперматозоидами). В окрашенных синью или по Граму препаратах трихомонады представляются разной величины и формы – круглые, овальные, грушевидные, контуры хорошо прорисовываются, протоплазма синего цвета или при окраске по Граму – красноватого. Ядро овальной формы, иногда с заостренными концами, сходное с косточкой сливы, расположено эксцентрически и окрашено более интенсивно, чем протоплазма.
Культуральный метод . Культивирование трихомонад не является сложным, но необходимы специальные среды, такие как Дайамонда, Купферберга. Выделения (можно использовать осадок мочи) помещаются в питательный бульон, который инкубируется. В течение 5 дней ежедневно капля среды рассматривается под микроскопом до обнаружения подвижных трихомонад. Несмотря на точность, метод культуры применяется редко.
Серологические исследования . В последние годы появились новые методы: иммуносорбция (ELISA), моноклональные антитела, латекс-агглютинация, которые определяют растворимые антигены в концентрации от 50 нг/мл. Этот метод применяется для выявления хронических форм трихомониаза, бессимптомного трихомонадоносительства. Но их недолгое использование не дает возможности окончательно говорить об их надежности.
Бактериальный вагиноз
Это патологическое состояние влагалища, обусловленное общими и местными факторами, которые привели к изменению влагалищной среды. К причинам возникновения заболевания имеют отношение анаэробные неспорогенные микроорганизмы. Синдром характеризуется появлением обильных выделений со специфическим запахом при отсутствии воспалительной реакции со стороны слизистой оболочки влагалища, при этом происходит резкое снижение количества палочек Додерлейна, которые обеспечивают подавление роста большинства болезнетворных микроорганизмов. Вследствие этого начинается размножение гарднерелл, бактероидов, пептококков. Наиболее важным этиопатологическим компонентом этого заболевания считаются гарднереллы вагиналис, впервые выделенные в 1953 г. Клинические проявления заболевания укладываются в следующую классификацию: бактериальный вагиноз, гарднереллез верхних половых путей, гарднереллез мочевых путей женщин, гарднереллез беременных, гарднереллез мочевых путей мужчин. Как правило, одновременно с гарднереллой вагиналис выделяют различные анаэробы (мобилункус, пептострептококки, бактероиды), но при этом не выделяются специфические возбудители, передаваемые половым путем. Основной симптом – обильные выделения с неприятным запахом – встречается лишь у 50 % больных. Инкубационный период заболевания составляет примерно 10 дней. Диагноз может быть установлен при наличии 3 из 4 признаков: «ключевые» клетки (более 20 %), pH влагалищной среды > 4,5, гомогенные кремообразные выделения, положительная проба с 10 %-ным КОН. Считается, что возникновение неприятного запаха обусловлено появлением патологических аминов – путресцина и кадаверина, образующихся в результате метаболизма ГВ и других неспорогенных анаэробных бактерий. Патологические амины в комплексе со щелочными растворами переходят в летучие соединения, характеризующиеся «рыбным» запахом во время половых связей и менструации, т. е. когда среда приобретает щелочную реакцию. В связи с этим проводится амиловый тест с 10 %-ным гидроксидом калия (КОН).
