Вторым этапом является посев и выделение культуры. Для этого материал, взятый для исследования, должен быть использован не позднее 3 ч после взятия (рвотные массы, кал).
Для посева используются среды: 1 %-ная пептонная вода (на этом этапе проводится ускоренная диагностика), 1 %-ная таурохолаттеллуритная пептонная вода, среда Мансура, среда Дьедона, агар Хоттингера, холерная среда Оксоида, ТСВ и др. После появления культуры проводят ее идентификацию по морфологическим, биологическим, тинкториальным (окраска возбудителя различными красителями) свойствам.
Целью следующего этапа является определение вида и биовара (внутривидовая классификация возбудителя). Применима реакция развернутой агглютинации с противохолерной сывороткой и типовыми сыворотками Инаба и Огава, а также реакция гемагглютинации куриных эритроцитов, пробы с полимиксином В и др. Положительный результат при классическом исследовании можно получить через 18–24 ч, а отрицательный – через 36 ч.
4. Для выявления антител к антигенам холерного вибриона применяют серологические методы – иммуноферментный анализ, реакцию нейтрализации . Методы для диагностики холеры не применяются, но используются для изучения свойств вибриона.
5. Исследование дуоденального содержимого проводят с целью исключения вибриононосительства, а также для подтверждения полной элиминации возбудителя в периоде реконвалесценции.
Ботулизм
Ботулизм – тяжелая пищевая токсикоинфекция, характеризующаяся действием ботулотоксина, попавшего с пищей, на холинергические структуры нервной системы. Особенно сильной тропностью ботулотоксин обладает по отношению к нервным структурам спинного и продолговатого мозга, что клинически проявляется периферическими парезами, глазными симптомами, нарушениями функции продолговатого мозга вплоть до апноэ и остановки сердца.
Для подтверждения диагноза проводят лабораторную диагностику, целью которой является обнаружение токсина и возбудителя ботулизма в материалах, взятых от больного (кровь, рвотные массы, промывные воды желудка, испражнения), а также в пищевых продуктах, которые пациент употреблял накануне. Кровь необходимо брать до введения антиботулотоксической сыворотки, что является обязательным. Ботулотоксин выявляют в реакции нейтрализации. Возбудителя ботулизма выявляют бактериологическим методом – посев на питательные среды (пепсин-пептон, среда Китта – Тароцци, бульон Хоттингера), получение культуры, изучение свойств, идентификация возбудителя.
Колиинфекция
Колиинфекция – классическая кишечная инфекция, течение которой обусловлено действием некоторых серогрупп кишечной палочки (эшерихий) на стенку желудочно-кишечного тракта. Таким образом, не все разновидности кишечной палочки являются возбудителями колиинфекции. Некоторые из них обитают в нашем кишечнике и являются условно-патогенными по отношению к человеку микробами. Колиинфекция протекает с клинической картиной гастроэнтерита и гастроэнтероколита, что характерно для многих кишечных инфекций и поэтому требует дополнительных методов исследования.
Важнейшая роль в распознавании колиинфекции принадлежит лабораторной диагностике. Для идентификации возбудителя проводят бактериологический метод исследования, при котором не только устанавливают род и вид выделенной чистой культуры, но и определяют принадлежность ее к серогруппе. Внутривидовая идентификация заключается в определении серовара, а также обязательно определение антибиотикограммы (определение групп антибиотиков, к которым чувствительна данная эшерихия). Материалом являются рвотные массы или испражнения больного.
Методы иммунодиагностики не используют из-за разнообразия схожих антигенов у шигелл, эшерихий и многих других бактерий. К тому же в них нет необходимости в связи с тем, что времени для диагностики достаточно, чтобы провести бактериологическое исследование. Колиинфекция не дает эпидемий, течение заболевания – нетяжелое. С целью научного исследования проводят серологические реакции, такие как РНГА, хотя практического значения это не имеет.
Бруцеллез
Бруцеллез – редко диагностируемая, чаще хроническая инфекция, характеризующаяся проникновением возбудителя (Br. melitensis, Br. abortus bovis, Br. abortus suis, Br. neotomae, Br. canis, Br. ovis) в организм человека через слизистые, кожу, а также полисистемным поражением и длительной лихорадкой. Бруцеллез – зоонозная инфекция (источники инфекции – больные животные, чаще – мелкорогатый скот, реже – крупнорогатый скот и свиньи), и заражение происходит чаще всего через мясо, сыр, молоко, брынзу, т. е. алиментарно. Потому бруцеллез относится к кишечным инфекциям, хотя возможны контактный и аэрогенный пути заражения.
Диагностика . Каждый случай заболевания бруцеллезом необходимо лабораторно подтвердить, так как возможна ошибка в клинической диагностике. В качестве лабораторной диагностики применяют бактериологический, серологический и аллергологический методы исследования. Выделяют следующие методы исследования.
1. Выделение культуры и идентификация возбудителя бруцеллеза в материалах, полученных от больных, является абсолютным и самым надежным подтверждением диагноза. Но бактериологическое исследование проводят в специальных лабораториях из-за их сложности и необходимости соблюдения мер предосторожности, а также длительности проведения (рост культуры в случае удачного посева составляет по времени около месяца). В качестве материала для исследования используют специально приготовленные препараты из крови, костного мозга, желчи, мочи, лимфатических узлов, цереброспинальной жидкости, синовиальной жидкости (при артритах), влагалищного отделяемого, пунктата селезенки (желательно использовать биологическую жидкость, взятую из места, наиболее проявляющегося клинически).
В последнее время часто выявляют L-формы бруцелл. L-формы бактерий – их способность к «замедленному» и тем самым менее требовательному образу жизни. Морфологически это выглядит изменением формы и нередко – потерей оболочки. Это дает бактериям возможность выживать в условиях, невозможных для нормальной формы, хотя в период L-формы бактерии теряют способность размножаться и почти всегда непатогенны и не способны к выделению токсинов. Как только такая форма попадает в благоприятные для микроба условия, происходит образование нормальной бактерии, способной к полноценной жизнедеятельности, включая размножение, токсинообразование. Принципы такого механизма лежат в основе хронизации инфекций, которые уже не всегда возможно адекватно санировать. Это связано с недостаточными и неполноценными приемами антибактериальных препаратов, а также со способностью микроорганизмов быстро адаптироваться к неблагоприятным для себя условиям за счет огромного количества бактерий в очаге.
2. Практически для лабораторной диагностики бруцеллеза достаточно применения метода иммунофлюоресценции , с помощью которого выявляют бруцелл в любых исследуемых материалах. Метод достаточно дорогой и не всем доступный, но моментальный.
3. В качестве серологической иммунодиагностики бруцеллеза используют реакцию агглютинации Райта . Результат часто бывает положительным уже с первых дней болезни. Положительной считается реакция, при которой титр агглютининов в сыворотке не менее чем 1: 200.
4. Ускоренная серодиагностика заключается в проведении пластинчатой реакции агглютинации Хеддльсона с неизмененной сывороткой и концентрированным антигеном . С целью диагностики возможно проведение РСК (реакция связывания комплемента), РНГА (реакция непрямой гемоагглютинации) и реакции Кумбса.
Методы имеют преимущество в более высокой чувствительности, чем другие серологические реакции. Причем разработан метод длительного связывания комплемента – РДСК, который позволяет выявить L-формы, но занимает 18 ч.
5. Аллергологические методы диагностики бруцеллеза включают в себя реакцию Бюрне . Она проводится внутрикожным введением бруцеллина – фильтрата бульонной культуры бруцелл. В большинстве случаев внутрикожная аллергическая про ба положительна к концу первого месяца болезни. Реакция положительна у людей, вакцинированных живой бруцеллезной вакциной, поэтому нельзя ограничиваться одним этим методом. Могут быть ошибки. Особое место отводится этой реакции в выявлении хронического бруцеллеза.
Расстройство количественного и качественного состава микрофлоры кишечника приводит к развитию заболевания – дисбактериоза, тяжелые формы которого проявляются клинически аналогично кишечным инфекциям. Исключение всех инфекций в ходе лабораторной диагностики указывает на дисбактериоз. К такому состоянию приводят прием антибактериальных средств, различные инфекции, психоэмоциональные и физические перегрузки и пр.
