сперматозоиды и обусловливает их неподвижность.
При микроскопии нативного препарата лейкоциты, эритроциты, клетки сперматогенеза, агглютинацию, зерна липидов, амилоидные тельца выражают в количестве на поле зрения.
Определение количественных и качественных особенностей сперматозоидов . Определение подвижности сперматозоидов является важнейшим параметром, характеризующим качество эякулята. Сперматозоиды, способные к оплодотворению, обладают подвижностью – совершают прямолинейное поступательное движение со скоростью 50 мкм/с. В эякуляте можно обнаружить сперматозоиды с нарушением подвижности – дискиноспермией в виде колебательных, манежных и других видов движения, которые в норме отсутствуют.
В норме активноподвижные сперматозоиды составляют 80–90 %, малоподвижные – 10–12, неподвижные – 6–10. Учитываются только те активноподвижные и малоподвижные сперматозоиды, которые совершают поступательные движения вперед. Используется и более развернутая пятибалльная шкала оценки:
«4» – отличная подвижность (все сперматозоиды обладают прямолинейной поступательной подвижностью со значительной скоростью);
«3» – хорошая подвижность (несколько сниженная);
«2» – посредственная подвижность (много неподвижных сперматозоидов, но с вибрирующими хвостами);
«1» – плохая подвижность (отсутствие поступательного движения, подвижность только хвостов сперматозоидов);
«0» – движение сперматозоидов отсутствует.
Фертильность эякулята зависит от продолжительности подвижности сперматозоидов, поэтому необходимо определять подвижность сперматозоидов в динамике (динамическая кинезисграмма). Под микроскопом определяют процент активноподвижных, малоподвижных и неподвижных сперматозоидов через 1, 3, 6, 12 и 24 ч после эякуляции. В норме количество активноподвижных сперматозоидов снижается через каждые 2–3 ч на 20 %.
Проба на «оживление» сперматозоидов основана на восстановлении нормальной подвижности неподвижных, но живых сперматозоидов с помощью стимулирующих растворов. После стимуляции через 5–10 мин неподвижные, но живые сперматозоиды начинают двигаться. Процент подвижных сперматозоидов определяют сразу же при восстановлении подвижности и спустя 3, 6, 12 и 24 ч. Только при условии невозможности «оживить» неподвижные сперматозоиды можно говорить о некроспермии.
В норме в 1 мл эякулята содержится 60–120 млн сперматозоидов, при гиперспермии – более 120 млн, при олигоспермии – от 30 до 60 млн, что, как правило, делает оплодотворение невозможным. Однако описаны случаи, когда оплодотворение наступает и при содержании в 1 мл эякулята от 5 до 30 млн сперматозоидов.
В любом случае при выявлении олигоспермии необходимы 2–3 контрольных подсчета числа сперматозоидов с интервалами в 3–4 недели для установления их максимального количества. У одного и того же мужчины число сперматозоидов подвержено значительным физиологическим колебаниям.
В норме во всем эякуляте содержится более 150 млн сперматозоидов.
Сперматограмма – это процентное соотношение различных морфологических форм сперматозоидов и клеток сперматогенеза. В нормальном эякуляте нормальные формы сперматозоидов составляют 80–85, иногда 100 %, в их число входят физиологические варианты, которые характеризуются или необычно суженной, или уменьшенной, или увеличенной головкой.
Молодые, или незрелые, формы сперматозоидов имеют вокруг головки и шейки остаток цитоплазмы («воротничок»), наблюдаются при частых половых сношениях и не способны к оплодотворению.
Старые формы сперматозоидов появляются в эякуляте после продолжительного полового воздержания и непригодны для оплодотворения. К патологическим формам относятся сперматозоиды с деформациями головки: мегалосперматозоиды (гигантосперматозоиды), макро‑, микросперматозоиды, конические, двуглавые сперматозоиды с одной шейкой и одним хвостом, без шейки с одним или несколькими хвостами, без хвоста, с хвостом, но без головки и пр.
У здоровых мужчин в нормальном эякуляте патологические формы сперматозоидов обычно не встречаются, но иногда их количество при нормальной оплодотворяющей способности эякулята может достигать 20 %, из них приблизительно 15 % составляет патология головки, 3–5 – тела, 2–5 – хвоста.
При патологическом сперматогенезе, секреторной форме бесплодия выявляются сперматозоиды с патологией головки и шейки. Патология хвоста обычно экскреторного происхождения, возникает при прохождении сперматозоида по семявыносящим путям.
Сперматогонии несколько раз митотически делятся. Встречаются клетки с хорошо определяемыми стадиями митоза.
Часть клеток, образовавшихся в результате митоза, дифференцируются в сперматоциты I, а затем II порядка.
Возможно наличие многоядерных сперматид. Сперматиды превращаются в сперматозоиды.
Клетки сперматогенеза в нормальной сперматограмме составляют не более 2 %. Большое количество их наблюдается при бесплодии секреторного характера.
На основании микроскопического исследования эякулята можно выявить различные патологические состояния:
1) аспермию – отсутствие в эякуляте сперматозоидов и клеток сперматогенеза;
2) азооспермию – отсутствие сперматозоидов при наличии клеток сперматогенеза;
3) астеноспермию – уменьшение числа подвижных клеток и увеличение числа патологических форм при нормальном общем количестве сперматозоидов;
4) олигоастеноспермию – уменьшение числа сперматозоидов и их подвижных форм и увеличение количества патологических форм;
5) некроспермию – неподвижность всех сперматозоидов в препарате даже после «оживления»;
6) акиноспермию – состояние, при котором, в отличие от некроспермии, ранее неподвижные сперматозоиды после «оживления» начинают активно двигаться.
Активность кислой фосфатазы (КФ) в эякуляте во много раз превышает ее активность в крови. Кислая фосфатаза входит в состав секрета предстательной железы, продукция ее стимулируется мужскими гонадотропными гормонами.
Средний цитохимический коэффициент кислой фосфатазы сперматозоидов в нормальном эякуляте составляет 2,0–2,4.
Сукцинатдегидрогеназа (СДГ) – фермент, участвующий в окислительно‑восстановительных реакциях, содержится в клетках эякулята в значительном количестве.
Средний цитохимический коэффициент (СЦК) СДГ сперматозоидов в нормальном эякуляте составляет 2,7 ± 0,3.
Изменения содержания гликогена в различных клетках отражаются на их функции или свидетельствуют о развитии патологического процесса.
В зрелых сперматозоидах гликоген отсутствует. В цитоплазме молодых сперматозоидов, особенно с «воротничком», выявляются следы гликогена (±), иногда в виде единичных гранул в верхней части головки или в области «воротничка». В клетках сперматогенеза гликоген обнаруживается в большом количестве. По мере созревания клетки теряют гликоген вплоть до исчезновения его в зрелых сперматозоидах.
Повышенное содержание рибонуклеиновой кислоты (РНК) в клетках свидетельствует о высокой активности их в отношении роста, секреторной, синтетической и другой деятельности. Снижение содержания РНК в молодых клетках часто сопряжено с пониженной способностью этих клеток к регенерации.
Зрелые сперматозоиды не содержат РНК. Клетки сперматогенеза богаты РНК, количество которой убывает в клетках по мере их созревания.
В клетках сперматогенеза содержится большое количество гликогена, РНК и значительно выражена активность СДГ и КФ. Однако, как правило, эти клетки единичные в эякуляте, поэтому подсчет СЦК нецелесообразен.
Цитохимическая характеристика лейкоцитов является важным показателем их функциональной активности.
Диагностика иммунологически обусловленного бесплодия . В процессе длительной супружеской жизни без применения противозачаточных средств, а также при наличии микроповреждений в области слизистых оболочек половых органов может происходить постепенная местная иммунизация антигенами сперматозоидов. При обычном обследовании супругов, состоящих в бесплодном браке, не удается установить причину бесплодия в 10–15 % случаев. Именно в этой группе бесплодных супругов при применении специальных методов обследования в секрете канала шейки матки, плазме эякулята и сыворотке крови часто выявляются антиспермальные антитела (АСАТ). Используются качественные и количественные тесты иммунологического исследования.
Посткоитальный тест (ПКТ) относится к качественным иммунологическим тестам. Отрицательный результат теста свидетельствует об отсутствии сперматозоидов в секрете канала шейки матки, но не позволяет определить причину их отсутствия.
По количеству подвижных сперматозоидов в секрете канала шейки матки, полученном после коитуса, устанавливают степень нарушения их проникающей способности при бесплодии или невосприимчивости к ним слизи канала шейки матки.
Для проведения ПКТ необходимо соблюдение следующих условий: исследование должно проводиться в периоде овуляции, который выявляется кольпоцитологическим или другим методом, после предшествовавшего полового воздержания супругов в течение 2–3 дней.
Проводят исследование таким образом. После обычного коитуса женщина в течение 30 мин должна лежать на спине, согнув ноги в коленях. Спринцевание и подмывание запрещаются, необходима только гигиеническая прокладка, которая удаляется при взятии для исследования слизи канала шейки матки. Через 2–4 ч после коитуса, допустимо и через 6–10 ч (время, прошедшее до момента исследования, указывается в анализе), эндоцервикальная слизь аспирируется и исследуется под микроскопом. В препарате могут обнаруживаться сперматозоиды с активной поступательной подвижностью, качательными движениями (феномен качания) и неподвижные. Далее оценивают результат.
Отличный (соответствующий норме): в поле зрения до 15–20 сперматозоидов с активной поступательной подвижностью и более. Сперматозоиды с феноменом качания составляют менее 25 %.
Удовлетворительный: в поле
